Procédure pour la réalisation du test ImuPro en laboratoire

Production des microplaques de test ImuPro

Réception des microplaques non sensibilisées.

270 produits alimentaires sont utilisés pour l’élaboration des tests. Les protéines sont extraites. Il est important de garantir que les extraits d'aliments reflètent avec précision la nature des protéines qui sont impliquées dans la réaction allergique de type III.

Ces 270 différentes solutions de protéines d’origine alimentaire (aliments) sont distribués dans les microplaques non sensibilisées. Il est important de distribuer chaque extrait d'allergène dans un puit individuel bien identifié dans la microplaque. Les extraits d’allergènes ne sont pas mélangés. S’il y avait 2, 3 ou même 4 aliments dans la solution placée dans chaque puits, il serait impossible de savoir ce qui a provoqué la réaction. Cela augmenterait le niveau de restriction temporaire requis pour votre nouvelle alimentation.

Après cette opération de sensibilisation des microplaques, celles-ci sont envoyées à un laboratoire de diagnostic spécialisé. Elles sont prêtes à être utilisées pour votre échantillon.

Pipetage de l'échantillon du patient

L'échantillon de sérum contenant les anticorps IgG est traité au laboratoire et réparti sur la totalité de la ou des microplaques, avec une fraction dans chaque puits.

Au cours d'une réaction de 90 minutes, les anticorps IgG présents dans le sérum peuvent se lier aux antigènes alimentaires correspondants (protéines), tout comme 2 pièces dans un puzzle. De par leur fonction, ces anticorps ne se lient qu'à leurs homologues respectifs, ce qui nous permet de mettre en évidence contre quel produit alimentaire votre organisme produit ces anticorps.

Dans l’exemple choisi, une grande quantité d'anticorps ont été générés contre les protéines d'orange, et de plus, le sérum contient une petite quantité d'anticorps contre les protéines de blé et pas d'anticorps contre les protéines de tomate.

Les anticorps dirigés contre le blé se lient dans le puits qui contient des protéines de blé. A noter: cette liaison est très forte, de telle sorte que les protéines de blé «capturent» exclusivement les anticorps spécifiques dans ce puits. Les anticorps contre l'orange ne peuvent pas se lier car ils ne correspondent pas aux protéines de blé et ne sont donc pas capturés dans ce puits.

Lavage de la plaque de microtitration

Dans l'étape suivante, les micro plaques sont lavées, c.-à-d. le liquide (sérum) est éliminé des plaques par rinçage. Seuls les anticorps qui se sont liés à des protéines alimentaires (qui sont capturés) restent dans les puits.

Pipetage d’une solution d’anticorps reconnaissant les IgG fixés aux antigènes dans la microplaque

Ensuite, une substance est appliquée sur la microplaque qui permet de «visualiser», par la mesure de couleur, la fixation des anticorps IgG de votre échantillon.

Ce second anticorps (à ne pas confondre avec les anticorps de votre échantillon) est capable de se lier à tous les anticorps IgG de votre échantillon qui n'ont pas été éliminés lors de l'étape de lavage précédente. En d'autres termes, cet anticorps «détectera» tous les IgG qui se lient aux denrées alimentaires qui sont présentes dans les puits de la plaque et qui capturent les IgG de votre échantillon. La particularité de cet anticorps est qu'il porte une enzyme qui génère une réaction colorée. Au cours d'une réaction de 90 minutes, cet anticorps se lie aux extrémités des anticorps IgG présents.

Lavage de la plaque de microtitration

La microplaque est lavée à nouveau. Seuls les anticorps reconnaissant les IgG s’étant liés aux extrémités des anticorps IgG présents (ceux qui se sont liés aux protéines alimentaires) restent dans le puits

Pipetage d'une solution de coloration - réaction colorée

Une solution de coloration est maintenant ajoutée: cette solution est d'abord incolore

Lorsque des anticorps sont présents, les enzymes déclenchent une réaction colorée pendant une durée de réaction de 60 minutes. En fonction de la quantité d'anticorps dans un puits, la réaction colorée sera plus ou moins intense.

L'intensité de cette réaction de coloration est proportionnelle à la quantité d'anticorps IgG dans votre échantillon - les titres d'anticorps (dosage) IgG peuvent donc être déterminés.

Évaluation et préparation de vos documents personnels

Pour finir, les résultats sont calculés. Sur la base des valeurs du titre d'anticorps, les produits alimentaires sont classés en trois groupes: «non élevé», «élevé» et «très élevé» (sauf pour ImuPro Screen). Le laboratoire prépare puis imprime votre document personnel regroupant vos résultats ainsi que les explications par rapport à ceux-ci.